De dramaserie Zussen is op verschillende locaties in Nederland opgenomen, met name in de omgeving van Werkhoven in de provincie Utrecht.
Een aantal specifieke filmlocaties zijn:
De Brink in Werkhoven: Hier werden scènes opgenomen in het dorpsplein en in de cafés en restaurants die daaraan liggen.
Landgoed De Bergse Bossen: Dit landgoed diende als decor voor de boerderij waar de zussen Rolinde en Nienke wonen.
Annarolonda: Dit kasteel in Vinkeveen werd gebruikt voor de opnames van het landhuis van de rijke zakenman Richard, de vader van de zussen.
Studio's in Amsterdam: Voor een aantal binnenopnames is er gebruik gemaakt van studio's in Amsterdam.
Naast deze locaties zijn er ook nog opnames gemaakt in andere dorpen en steden in de omgeving van Utrecht, zoals Bunschoten, Houten en De Bilt.
De keuze voor deze locaties is mede ingegeven door het feit dat de serie zich afspeelt op het platteland. De makers wilden een authentieke sfeer creëren en vonden in de omgeving van Werkhoven de perfecte locaties om dat te realiseren.